配對抗體的制備與篩選

配對抗體指的是可以同時結合在一個抗原分子上的兩個抗體。配對抗體，一般應用于雙抗夾心法 ELISA 實驗。

抗體配對的原理

通常情況下，一個抗原分子擁有多個抗原決定簇，將抗原注射入動物體內進行免疫，針對不同的抗原決定簇會產生不同的抗體。產生的抗體具有特異性與專一性，即一個抗體分子只會特異性地結合一個抗原決定簇。兩個針對不同抗原決定簇的抗體，有可能同時結合到抗原分子上。如果兩個抗體同時結合到同一個抗原分子上，那么這兩個抗體就是配對抗體。

配對抗體的制備與篩選

需要注意的是，即使兩個抗體針對的是不同的抗原決定簇，也并不意味著這兩個抗體分子一定可以同時與抗原分子結合。當一個抗體與抗原結合后，有可能會導致其他結合位點（抗原決定簇）構型的改變，從而導致其他的抗體無法正常結合到抗原上。位阻效應的存在，也可能使兩個結合位點距離較近的抗體無法同時結合在抗原上。因此想要得到可以同時結合在抗原分子上的配對抗體，在制備出抗體后，還需要對得到的抗體進行篩選。這就意味著，要制備配對抗體，要完成以下兩步工作：抗體的制備；配對抗體的篩選。

抗體制備

 為了便于后續的篩選，制備的抗體應為單克隆抗體，通常利用雜交瘤技術進行單克隆抗體的制備。 注意：如果單克隆抗體很少，很可能會找不到可以配對的抗體，因此，在免疫動物的時候，應多免疫幾只動物，以獲得更多的單克隆抗體。

配對抗體的篩選

通常，配對抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法。篩選的原理為：在得到了單克隆抗體后，從中取出兩種單克隆抗體，一種作為捕獲抗體，另一種作為標記抗體（HRP 酶標記），將捕獲抗體包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未結合的抗原，再加入標記抗體 孵育后洗去未結合的標記抗體，最后加入顯色液顯色。如果可以顯色，說明標記抗體與抗原特異性結合，該捕獲抗體與標記抗體為一對配對抗體。如果不能顯色，說明標記抗體不能與抗原結合，從而被洗脫，該捕獲抗體與標記抗體不是配對抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進行配對，則需重新選擇兩種單抗，重新進行試驗，直至找出可以配對的抗體。

 配對抗體的應用

利用雙抗夾心法對目的抗原進行定性定量的檢測，必須要用到可以同時與目的抗原結合的配對抗體。對于比較常見的目的抗原，可以通過購買試劑盒的方式得到相應配對抗體。但是市面上試劑盒的種類有限，有些目的蛋白在市面上無法買到對應的試劑盒，為了進行雙抗夾心法 ELISA 實驗，需進行相應的配對抗體的生產。