如何使用聚乙二醇獲得高質量純化質粒

都知道大量提取的質粒DNA一般需進一步純化，常用柱層析法和氯化銫梯度離心法。常使用的所有純化方法都利用了質粒DNA 相對較小及共價閉合環狀這樣兩個性質。例如，用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心分離質粒和染色體DNA 就取決于溴化乙錠與線狀以及與閉環DNA分子的結合量有所不同。但是此類方法也存在了一些例如使用化學物質誘導質粒突變的弊端，所以新的純化方式的摸索很有必要的。

其中很好的方法，也應是聚乙二醇分級沉淀法。首先我們了解一下什么是聚乙二醇(PEG)，聚乙二醇是一種高分子聚合物，化學式是HO(CH2CH2O)nH，無刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并與許多有機物組分有良好的相溶性。

PEG為一種非離子多聚物，多離子多聚物是六十年代發展起來的一類重要沉淀劑?；诙嗑畚锏某恋碜饔弥饕蕾囉诙嗑畚锏臐舛群捅怀恋砦锏姆肿恿看笮?，Laurent等(1967)提出PEG的沉淀機理主要是通過空間位置排斥，使液體中的微粒(包括生物大分子、病毒和細菌等)被迫集聚在—起而引起沉淀的發生。PEG最早應用于提純免疫球蛋白(IgG)和沉淀一些細菌病毒，后來逐漸應用于核酸和酶的分離純化，特別是用PEG分離質粒DNA，已相當普遍。

那么如何利用PEG進行質粒純化呢？

下面介紹一下PEG純化質粒的一般操作步驟：

1   向質粒溶液中加入等體積的用無菌的1.6M NaCl配置的13% w/v PEG 8000；

2   將試管內的物質渦旋充分混勻，然后-20°C孵育1 h至過夜

3   最高轉速 4°C離心30 min；

4   輕柔吸取去上清，收集沉淀；

5   用500 μl 70% 乙醇沖洗顆粒，并短暫渦旋；

6   最高轉速 25°C離心5 min，去除70% 乙醇；

7   再次離心去除酒精，干燥沉淀后溶解。

該操作的優點在于：操作條件溫和，不易引起生物大分子的變性。同時具有很高的沉淀效能，少量的PEG可以沉淀相當多的生物大分子。