培養基常見問題

一、如何選用培養基?   選擇培養基沒有一定標準，有幾點建議可供參考：

1. 建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞第一個選的培養基?？梢圆殚單墨I，或在購買細胞株時咨詢。

2. 根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選1640；進行細胞雜交、基因轉移實驗，可選擇IMDM。

3. 用多種培養基培養目的細胞，觀察其生長狀態，可以用生長曲線、集落形成率等指標判斷，根據實驗結果選擇最佳培養基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養和凍存條件，以及相關文獻等資料。

二、液體培養基可以放-20℃保存嗎？

不可以！因為在-20℃下，培養基中的鹽容易析出，培養基融化后，有的鹽可能無法重新溶解，從而導致培養基滲透壓降低，培養細胞時，細胞容易破裂而死亡。   

三、新配制的液體培養基能保存多久？

我們建議將新配制的培養基放置于4℃，避光保存盡量在一周內使用完畢。培養基越新鮮越好。

四、培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

五、培養基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統外，一般正常培養狀態下，培養基中不應添加任何抗生素。

為防止細菌、真菌污染，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。   

六、為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值越來越偏堿性？

培養基保存于4℃冰箱中， 培養基內之CO₂ 會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果， 將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時， 可以通入無菌過濾之CO₂， 以調整pH 值。

七、培養液pH是怎樣影響細胞生長的？

由于大多數細胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對PH值要求也不全部相同，原代細胞培養一般對PH值變動耐受差，無限細胞系耐受力強。 但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更有利于細胞的生長。因此，配制培養用液時可把液體的PH值稍微調的偏酸一些。液體在經過0.1um或0.2um濾膜過濾時，PH值會向上浮動0.2左右。

八、為什么液體培養基1640顏色發黃，是pH值不對嗎？

不是。因為配方原因，1640為堿酚紅型，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一，所以是因為酚紅濃度低，而非PH值低。

九、為什么有客戶要求培養基中不含酚紅？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類反應，細胞培養，尤其是哺乳類細胞時，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時，不使用加酚紅的培養基。

十、放置在冰箱中的培養基顏色會發生變化，為什么？

培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO₂會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長停滯或死亡。培養基偏堿時，可以通入無菌過濾的CO₂，以調整pH值。

十一、無血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？

當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會結合和滅活一些抗生素。而在無血清培養條件下，抗生素不被滅活。

十二、培養基各個成分的作用有哪些？

1.NaHCO₃的作用是什么？

與二氧化碳一起形成緩沖系統，保持培養基PH值穩定。

2.丙酮酸鈉的作用是什么？

丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM，-20℃保存，培養基中的終濃度為1mM.

3.加入HEPES有何好處？

培養基中經常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營養，但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。HEPES的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的HEPES加入到200ml全部培養基中。

4.酚紅的作用是什么？

酚紅在培養基中被用來作為PH值指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么？

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養細胞的能量來源，參與蛋白質的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20℃冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4度冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。

試驗操作中常配制高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分裝使用，-20℃保存。使用時，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml全部培養基中，使其終濃度為2mM培養基。