ATCC細胞的活性檢測方法概述

　　ATCC細胞作為生命科學研究中廣泛使用的細胞資源，其活性檢測是確保實驗成功的關鍵環節。準確評估ATCC細胞活性，能為科研人員提供細胞健康狀況的重要信息，助力實驗順利開展。以下介紹幾種常見的檢測方法：

　　1.臺盼藍染色法

　　臺盼藍染色法是一種簡單且常用的細胞活性檢測方法。臺盼藍是一種陰離子型染料，不能透過活細胞完整的細胞膜，但可進入細胞膜受損的死細胞內，使其染成藍色。具體操作時，將適量細胞懸液與一定比例的臺盼藍染液混合，在顯微鏡下觀察。統計視野中未染色的活細胞和被染成藍色的死細胞數量，通過計算活細胞占總細胞數的百分比，即可得出細胞活性。

　　2.MTT比色法

　　MTT比色法基于活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT（一種淡黃色的四氮唑鹽）還原為不溶性的藍紫色結晶甲瓚并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。首先將細胞接種于96孔板中，培養一定時間后加入MTT溶液，繼續孵育。隨后棄去上清液，加入二甲基亞砜（DMSO）溶解甲瓚結晶，通過酶標儀測定各孔在特定波長下的吸光度值。吸光度值與活細胞數量呈正相關，由此可間接反映細胞活性。該方法靈敏度較高，能定量檢測細胞活性，且可用于檢測細胞增殖和細胞毒性等，但MTT還原產物甲瓚的溶解過程可能存在誤差，且MTT本身有一定毒性，對細胞有潛在影響。

　　3.CCK-8法

　　CCK-8法是MTT法的改進版。CCK-8試劑中含有WST-8，在1-methoxy PMS作用下，能被活細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物。其操作過程與MTT法類似，將CCK-8試劑加入培養有細胞的孔板中，孵育一段時間后，用酶標儀測定吸光度。該方法相比MTT法，操作更簡便，無需后續溶解步驟，且產物水溶性好，檢測結果更穩定、準確，靈敏度更高，對細胞毒性也更小。不過，CCK-8試劑價格相對較高，成本上有一定限制。

　　4.流式細胞術

　　流式細胞術可對單個細胞進行多參數定量分析，用于檢測細胞活性時，常結合熒光染料。例如使用碘化丙啶（PI）和鈣黃綠素-AM雙染法。鈣黃綠素-AM可被活細胞內的酯酶水解，生成綠色熒光產物，而PI只能進入細胞膜受損的死細胞，使其發出紅色熒光。通過流式細胞儀檢測細胞的熒光強度，根據熒光信號區分活細胞、死細胞和凋亡細胞，并計算各類細胞的比例，從而精確評估細胞活性。該方法能同時獲取大量細胞的信息，分析速度快、精度高，但設備昂貴，操作復雜，對技術人員要求較高。

　　每種ATCC細胞活性檢測方法都有其優缺點和適用場景。科研人員需根據實驗目的、細胞類型以及實驗條件等因素，選擇合適的檢測方法，以準確評估ATCC細胞活性，為細胞研究工作奠定堅實基礎。