<span id="whzor"><optgroup id="whzor"><center id="whzor"></center></optgroup></span>

      <li id="whzor"><big id="whzor"><listing id="whzor"></listing></big></li>
      <label id="whzor"><meter id="whzor"></meter></label>
        <label id="whzor"><meter id="whzor"></meter></label><label id="whzor"><meter id="whzor"></meter></label>

        <span id="whzor"><optgroup id="whzor"></optgroup></span>
        歡迎光臨北京和一生物科技有限公司網站!
        誠信促進發展,實力鑄就品牌
        服務熱線:

        18102086003

        產品分類

        Product category

        技術文章 / article 您的位置:網站首頁 > 技術文章 > inspiralis ——————超螺旋檢測

        inspiralis ——————超螺旋檢測

        發布時間: 2024-05-30  點擊次數: 796次

        DNA 旋轉酶是一種不一樣的拓撲異構酶,因為它是能夠催化 DNA 負超螺旋的酶。該過程依賴于 ATP,通過雙鏈 DNA 的切割和重新連接以 2 步進行。

        有關該反應的概述,請參閱:McKie ,  SJ 、  Neuman,  KC和 Maxwell,  A.  ( 2021 )。DNA 拓撲異構酶:通過結構功能分析進一步了解細胞作用和多蛋白復合物。BioEssays  ,  43 ,e2000286。

        典型反應如下:

        將 1 U DNA 促旋酶與 0.5 µg 松弛 pBR322 DNA 在 30 µl 反應體系中在 1X 檢測緩沖液中于 37°C 下孵育 30 分鐘

        通過添加 30 µl 氯仿/異戊醇 (24/1) 和 30 µl 終止緩沖液 (STEB:40% 蔗糖、100 mM Tris.HCl (pH 7.5)、100 mM EDTA、0.5 mg/ml 溴酚藍) 來終止每個反應,然后將其加載到瓊脂糖凝膠上。(0.8%-1.0%:w/v)

        凝膠可以在 TBE(90 mM Tris.Borate、2 mM EDTA)或 TAE(40 mM Tris.Acetate、2 mM EDTA)中運行,但如果在 TAE 中以最高 90V 運行 2 - 3 小時,超螺旋 pBR322 的分辨率會好得多。

        典型凝膠:

        大腸桿菌促旋酶超螺旋

        所用的 DNA 底物(本例中為松弛的 pBR322)通常由瓊脂糖凝膠上的一系列條帶組成。這些條帶是拓撲異構體(具有不同連接數的 DNA)。

        用 DNA 促旋酶處理松弛的 pBR322 可將松弛的拓撲異構體轉化為質粒的超螺旋形式,后者在瓊脂糖凝膠上遷移速度更快。還可以看到上部條帶,這是開環(有缺口)DNA,它存在于松弛的基質中,但與一些松弛的拓撲異構體一起遷移。

        嵌入劑

        如果凝膠槽中存在溴化乙錠或氯喹等污染物,則檢測可能會出現問題。這些化學物質是嵌入劑,會影響 DNA 的移動性,導致結果混亂。如果緩沖液中存在嵌入劑,則松弛的拓撲異構體會提高移動性,并大致在與負超螺旋質粒相同的位置運行。根據嵌入劑的量,負超螺旋 DNA 的移動性可能略低于正常水平。

        核酸酶

        如果檢測中存在污染性核酸酶(由于檢測緩沖液被污染或細胞表達的不純級分),切口可能會顯著增加,從而導致開環 DNA 的數量增加,并可能產生線性 DNA。這在 OC 和 SC 之間以單一帶的形式運行。

        ATP

        之前活性酶的活性喪失可能是由于緩沖液中 ATP 的劣化所致,盡管 5X 檢測緩沖液已被開發以盡量減少這種情況。如果發生活性喪失,則在反應中添加額外的 ATP 將克服該問題。

         


        北京和一生物科技有限公司專業代理antibodiesinc全系列產品,專營進口生物試劑,科學儀器,實驗消耗品,化工原料及藥物中間體等。公司與諸多國外品牌簽下代理,sigma、santaRD、AbcamCST、toxinstreck、Biolegendebioscience、saracare、polyplus、Beyotime、Novus、moltox等,能為廣大科研用戶提供數萬種試劑、儀器和實驗消耗品。

        我們公司的優勢:

        1:與500多家公司合作,基本什么品牌都能進口,包括血清,抗體,耗材,還有部分限制進口的

        2:部分產品現貨,物流穩定

        3:一手貨源,價格價格優,售后齊全,歡迎新老客戶咨詢訂購

         




        主站蜘蛛池模板: 久久国产精品萌白酱免费| ww在线观视频免费观看w| 国产精品99久久免费| 日本高清不卡中文字幕免费| 亚洲精品午夜无码电影网| 免费人成在线观看69式小视频| 最刺激黄a大片免费网站| 亚洲人成网站看在线播放| 亚洲精品色婷婷在线影院| 免费人成在线观看网站品爱网| 亚洲国产精品无码久久久秋霞2| 天天影视色香欲综合免费| 日韩在线观看免费完整版视频| 久久综合图区亚洲综合图区| 青青青青青青久久久免费观看 | 国产精品亚洲片在线花蝴蝶| 亚洲国产精品特色大片观看完整版 | 亚洲一区二区三区在线播放| 91热成人精品国产免费| 暖暖免费中文在线日本| 色偷偷亚洲女人天堂观看欧| 国产亚洲精品福利在线无卡一| 中文字幕无码视频手机免费看 | 毛片免费观看网址| 免费网站看av片| 黄色a三级三级三级免费看| 亚洲春色在线观看| 久久久久亚洲?V成人无码| 中文在线免费不卡视频| 亚洲精品天堂无码中文字幕| 亚洲电影一区二区三区| 成年人免费的视频| 日韩a级无码免费视频| 亚洲国产福利精品一区二区| 在线亚洲97se亚洲综合在线| 日本免费v片一二三区| 无码国产精品一区二区免费| 中文字幕久精品免费视频| 产传媒61国产免费| 相泽南亚洲一区二区在线播放| 中中文字幕亚洲无线码|